How to use a Hemocytometer Cell-counting Chamber - Mandarin

血细胞计数器细胞计数室

血细胞计数器是一个细胞计数室,用于确定液体样品中的细胞浓度。血细胞计数器由厚厚的玻璃显微镜载玻片组成,中间刻有4x4的线条网格。网格有预先确定的尺寸,因此线所覆盖的区域已经被计算在内。这样,研究人员就可以计算出特定体积溶液中的细胞数量。

细胞计数是研究的一个基本环节。近年来已经开发了几种自动细胞计数仪器,但血细胞计数器仍然是细胞计数的黄金标准方法。

血细胞计数器的工作原理

血细胞计数器室有仔细的蚀刻线,划定9个1mm2的区域。每个扇形又分为16个或25个大小相同的小方块(最常见的血细胞仪型号)。计数时,将一个特殊的载玻片放在室的顶部,表面和载玻片底部之间留有0.1mm的间隙。这样的体积为1mm2 x 0.1mm = 0.1mm3(1E-4 mL)。

当将细胞放置在室中时,它们会填满间隙中的可用空间,因此,每个1mm2扇区中可见的细胞都将以1E-4 mL的体积存在。这就是小规模测量细胞密度(以细胞/ mL为单位)的方式。

例子

对4x1mm2扇区中的细胞进行计数,得到以下计数31,25,40,33——平均每1mm2 32.25个细胞。已知面积对应于1E-4 mL的体积,而1E-4 mL中存在32.25个细胞,所以得到密度322500个细胞/mL。不需要任何公式——只是根据血细胞计数器的尺寸推断出细胞密度。将其扩展到一般情况,公式为细胞密度=(计数的总细胞数/计数的正方形数)/单个正方形的体积——在不考虑进行任何稀释的情况下。

对于1mm2的正方形,单个正方形的体积为1E-4,但是根据选择用于计算细胞的正方形大小,体积可能会有所不同。例如,中心方框内的小方框用于进行红细胞计数。在这种情况下,正方形体积为1E-4mL/25(在1mm2中心正方形中有25个较小的正方形),从而得到4E-6 mL的小正方形体积。

血细胞计数器的用途

细胞密度

细胞密度对于维持健康的培养、传代培养、建立细胞库、准备用于流式细胞仪和ELISA的样品以及简单地跟踪产物数量至关重要。在我的情况下,我必须使用它来匹配我的模型所做的细胞生长预测和培养物中观察到的实际细胞生长。另一方面,活力本质上是培养物健康的标志;它在毒性测试中也很有用,可以了解在给定细胞毒剂的特定时间内有多少细胞被杀死。

细胞活力

从血细胞计数器中可以得到的另一个有用的指标是细胞活力。计算活细胞可以衡量培养中所有细胞中活细胞的数量。可以通过在计数溶液中添加一种染色死细胞而不染色活细胞的染料来进行测量,然后在计数过程中分别记录下来,并以活细胞/总细胞(百分数)计算活力。

其他用途

血细胞计数器的使用也已扩展到其他领域。现在,血细胞计数器已被常规用于酿造过程中评估酵母菌的密度和质量,并用于蜂蜜生产中确定最终产品中花粉的密度。科技也促使了血细胞计数器发展到可以用一次性培养室进行自动细胞计数,并几乎可以立即获得结果。这种新方法对于广泛的普通细胞系效果相当好(并节省了大量的时间!),但对于更多的定制应用,如患有罕见疾病的病人细胞,可能需要进行微调。

HemocyTap应用程序——自动统计细胞计数和计算

用血细胞计数器进行细胞计数可能需要重复多次且非常耗时。特别是当每天需要处理10-20个样本,对存活细胞进行计数并即时对其进行计算。这就是我作为一个生物实验室的新人开始读博士时面临的问题。

一开始,我和其他人一样接受训练,每天勤勤恳恳地做着10-20个人工计数。但到了后来,我在实验室里做计算的时间比照顾细胞的时间还花得更多。我想一定有更好的方法,于是我将我的工程技能付诸实践,开发了一个应用程序,HemocyTap,帮助统计细胞数量,并自动进行这些日常计算。我开始在实验室里使用它,但后来其他人也开始用,我意识到我的实验室之外的其他人也可以从中受益。我把它上传到App Store,并开始得到评论。

那时,我也意识到围绕着整个计数细胞的话题有很多困惑,就像我所努力的那样,人们也在努力理解方案和计算背后的逻辑。我在网上找不到任何深入解决这个话题的资源,所以我创建了hemocytometer.org。这是我在2013年创建的。从那时起,网站已经有了很多更新发展。我也收到了数百个与计数细胞相关的问题和围绕它的技术——所以如果你在读完这篇文章后有任何问题,请到那里留下评论!

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作者:Maria Fuentes博士,HemocyTap血细胞计数器应用程序创建人

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