Western Blot Buffers & Recipes - Mandarin

蛋白质印迹缓冲液与配方

以下为蛋白质印迹缓冲液配方必需的所有材料,包括:封闭缓冲液、lammeli缓冲液、上样缓冲液、运行缓冲液、转移缓冲液和剥离缓冲液。有关蛋白质印迹的完整指南,请单击此处

蛋白质印迹是一种用于确定样品中是否存在所选蛋白质的技术。首先,通过凝胶电泳根据大小分离蛋白质。此后,通过使用电流将蛋白质转移到通常为硝酸纤维素膜或PVDF的膜上。然后用对目标蛋白质具有特异性的抗体对膜进行染色,从而可以获取有关蛋白质的定性或半定量信息。

蛋白质印迹缓冲液与配方

封闭缓冲液

  • TBST中的5%Marvel

Lameli缓冲液配方

  • 4% SDS
  • 10%2-巯基乙醇
  • 20%甘油
  • 0.004%溴酚蓝
  • 0.125 M Tris HCl.
  • • 检查pH值并将其调至pH6.8。

上样缓冲液配方

  • 2X 上样缓冲液
  • 100 mM Tris-HCL (pH6.8)
  • 200 mM DTT
  • 4% SDS
  • 0.2% 溴酚蓝
  • 20% 甘油
  • (应在使用缓冲液之前从1M原液中添加DTT)

NP-40 缓冲液配方

  • 150 mM 氯化钠
  • 1.0% NP-40(Triton X-100可以代替NP-40)
  • 50 mM Tris pH 8.0

分离凝胶配方

  • H20 5.9 ml
  • 30%丙烯酰胺双酚5mL
  • 1.5M Tris pH 8.8 3.8 ml
  • 10% SDS 150 µl
  • 10% APS 150 µl
  • Temed 6 µl

RIPA缓冲液配方

  • 50mM Tris HCL pH 7.4,
  • 50 mM NaCl,
  • 2mM EDTA,
  • 1% SDS.
  • 新鲜加入的蛋白酶抑制剂(载脂蛋白、亮抑酶肽、DTT和PMSF)

运行缓冲液配方

  • 15.1 g TRIZMA,
  • 94 g 甘氨酸
  • 50 ml of 10% w/v SDS,
  • dH20至1升

Tris-HCL 缓冲液

  • 20 mM Tris-HCl, pH 7.

Tris-Triton缓冲液

  • 10 mM Tris, pH 7.4
  • 100 mM NaCl
  • 1 mM EDTA
  • 1 mM EGTA
  • 1% Triton X-100
  • 10% 甘油
  • 1% SDS
  • 5% 脱氧胆酸盐

堆积凝胶配方

  • H20 2.7 ml
  • 丙烯酰胺-Bis 670 µl
  • Tris pH 6.8 500 µl
  • 10% SDS 40 µl
  • 10% APS 40 µl
  • Temed 3 µl

剥离缓冲液

  • 62.5 mM Tris-HCL,pH 7.8,
  • 100 mM -巯基乙醇,
  • 2% (w/v) SDS

TBS-T配方

  • 20 mM Tris, pH 7.5
  • 150 mM NaCl
  • 01% Tween 20

转移缓冲液配方

  • 8gTrizma碱
  • 9g 甘氨酸
  • 37g SDS 粉末
  • 200ml 甲醇
  • 多至1L的dH20

Additional Resources